Panggunaan lan pancegahan tabung centrifuge ultrafiltrasi
1) Pilih tabung ultrafiltrasi sing cocog.Elinga yen membran UF beda-beda ing tingkat toleransi kanggo macem-macem bahan kimia.Biasane, tabung ultrafiltrasi kanthi potongan bobot molekul 10 kDa bisa dipilih kanthi potongan bobot molekul sing ora kudu luwih saka 1/3 bobot molekul protein sing dikarepake, kayata 35 kDa.Yen bobot molekul protein sing dikarepake watara 10 kd, tabung ultrafiltrasi kanthi potongan bobot molekul 3 KD bisa digunakake.
(2) Ultrafiltrasi, mentas tuku, wis garing, karo banyu ultrapure ditambahake sadurunge digunakake lan banyu rampung liwati liwat membran, adus es utawa kulkas wis digawe adhem kanggo sawetara menit.Banyu banjur diwutahake, yaiku cairan protein, lan pira sing ditambahake, sing ora luwih saka garis putih ing ndhuwur tabung.Operasi kasebut entheng, lan tabung ultrafiltrasi kudu dipendhem ing es sadurunge nambahake solusi protein.
3) Massa lan pusat gravitasi kudu tekan keseimbangan.Elinga kacepetan rotasi lan akselerasi ora cepet banget, yen ora langsung ngrusak membran ultrafiltrasi.Ultrafiltrasi centrifugal diwiwiti (centrifuge precooled nganti 4 derajat).Sawise RPM centrifuges beda diowahi kanggo g, iku beda.Akselerasi centrifuge diatur kanthi minimal, ngurangi tekanan ing membran.Elinga, manawa kanggo ninggalake centrifuge sawise centrifuge wis tekan kacepetan panggonan, utawa yen sampeyan duwe masalah, sampeyan ora bisa nangani kanggo pisanan.Orientasi membran menyang spindle diatur miturut instruksi (kasus centrifuge sudut yaiku membran menyang sumbu tegak lurus).Ing panggunaan praktis, kacepetan rotasi umum luwih murah tinimbang ing pandhuan, supaya umur tabung centrifuge bisa ditambah.
3) Massa lan pusat gravitasi kudu tekan keseimbangan.Elinga kacepetan rotasi lan akselerasi ora cepet banget, yen ora langsung ngrusak membran ultrafiltrasi.Ultrafiltrasi centrifugal diwiwiti (centrifuge precooled nganti 4 derajat).Sawise RPM centrifuges beda diowahi kanggo g, iku beda.Akselerasi centrifuge diatur kanthi minimal, ngurangi tekanan ing membran.Elinga, manawa kanggo ninggalake centrifuge sawise centrifuge wis tekan kacepetan panggonan, utawa yen sampeyan duwe masalah, sampeyan ora bisa nangani kanggo pisanan.Orientasi membran menyang spindle diatur miturut instruksi (kasus centrifuge sudut yaiku membran menyang sumbu tegak lurus).Ing panggunaan praktis, kacepetan rotasi umum luwih murah tinimbang ing pandhuan, supaya umur tabung centrifuge bisa ditambah.
(4) Nalika klempakan kanggo 1ml isih, njupuk 50ul saka solusi buffer, nambah 10ul saka aliran liwat lan ndeleng apa ana werna biru, minangka paukuman apa tabung ultrafiltration ilang protein.Yen tabung bocor, re pour lapisan ndhuwur lan flowthrough menyang tabung anyar kanggo miwiti ultrafiltration.Kanggo nemtokake kanthi tepat yen tabung ora kejawab, centrifuge kanggo 10min karo 5mgml saka BSA sadurunge flowthrough, mlaku ing protein lim, utawa Bradford crude assay, lan terus nambahi solusi protein klempakan isih (kang operate ing es lan nyegah protein saka panas) nganti kabeh konsentrasi wis ditambahake.Ati-ati sajrone sentrifugasi yen ana presipitasi protein, sing nyebabake penutupan tabung.Yen presipitasi ana, nemtokake manawa panyebab tartamtu saka udan yaiku konsentrasi protein sing berlebihan utawa buffer sing ora cocog;Tilas bisa ditanggulangi kanthi ultrafiltrasi pirang-pirang tabung ultrafiltrasi bebarengan, nyuda konsentrasi, lan sing terakhir kanthi ngganti solusi buffer sing beda nganti ora ana udan protein.
(4) Nalika klempakan kanggo 1ml isih, njupuk 50ul saka solusi buffer, nambah 10ul saka aliran liwat lan ndeleng apa ana werna biru, minangka paukuman apa tabung ultrafiltration ilang protein.Yen tabung bocor, re pour lapisan ndhuwur lan flowthrough menyang tabung anyar kanggo miwiti ultrafiltration.Kanggo nemtokake kanthi tepat yen tabung ora kejawab, centrifuge kanggo 10min karo 5mgml saka BSA sadurunge flowthrough, mlaku ing protein lim, utawa Bradford crude assay, lan terus nambahi solusi protein klempakan isih (kang operate ing es lan nyegah protein saka panas) nganti kabeh konsentrasi wis ditambahake.Ati-ati sajrone sentrifugasi yen ana presipitasi protein, sing nyebabake penutupan tabung.Yen presipitasi ana, nemtokake manawa panyebab tartamtu saka udan yaiku konsentrasi protein sing berlebihan utawa buffer sing ora cocog;Tilas bisa ditanggulangi kanthi ultrafiltrasi pirang-pirang tabung ultrafiltrasi bebarengan, nyuda konsentrasi, lan sing terakhir kanthi ngganti solusi buffer sing beda nganti ora ana udan protein.
(5) Sawetara langkah pisanan digunakake kanggo konsentrasi protein, lan yen buffer bakal diganti, alon-alon nambah buffer anyar (ultrafiltration liwat membran ultrafiltration 0.22um) kanggo bab 1ml saka total protein, lan reconcentrate kanggo bab 1ml kanggo telung. kaping consecutive, karo volume final klempakan final gumantung ing konsentrasi protein sing dikarepake, umume ora luwih saka 500ul, nanging uga kanggo ing 200ul.Nggayuh 1000 × utawa luwih ing telung kesempatan, ateges akeh owah-owahan buffer, minangka diwilang dening paling 10 × utawa luwih volume pengayaan saben wektu.
(5) Sawetara langkah pisanan digunakake kanggo konsentrasi protein, lan yen buffer bakal diganti, alon-alon nambah buffer anyar (ultrafiltration liwat membran ultrafiltration 0.22um) kanggo bab 1ml saka total protein, lan reconcentrate kanggo bab 1ml kanggo telung. kaping consecutive, karo volume final klempakan final gumantung ing konsentrasi protein sing dikarepake, umume ora luwih saka 500ul, nanging uga kanggo ing 200ul.Nggayuh 1000 × utawa luwih ing telung kesempatan, ateges akeh owah-owahan buffer, minangka diwilang dening paling 10 × utawa luwih volume pengayaan saben wektu.
Wektu kirim: Nov-09-2022